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南昌代孕服务哪家好_57Vs6_瑞白上午打还是下午打好?_16Hi5_994I9_Zc3vF
发表日期:2023-04-24 07:24| 来源 :本站原创 | 点击数:866次
本文摘要:对于悬浮细胞:离心收集细胞,以2×106细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。08对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样
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上午或者是下午都可以打瑞白,可以在医生的建议根据自己的实际情况确定打针时间,因为打完瑞白后常见的副作用有发烧,浑身无力,以及骨痛等,所以为了减少瑞白副作用对日常生活的影响可以选择在晚上打。瑞白有一定的保胎作用,在试管婴儿移植后,适当使用瑞白可以促进胚胎着床,提高试管婴儿成功率。

瑞白有两种注射方式,皮下注射或者是静脉注射,注射时间可以根据自己的身体情况来选择,无论是上午、下午还是晚上都行,需要注意的就是打瑞白一定要在医生的指导下进行,不能随便使用,下面可以了解一下打瑞白的时间、方式以及注意事项:

1.打瑞白常见的副作用有肌肉酸痛,骨痛、腰痛、胸痛等,少见的还会出现食欲不振或肝脏异常的情况,所以为了防止瑞白的副作用对如上生活的影响,可以在下午或者晚上打;

2.瑞白可以选择皮下注射或者是静脉注射,皮下注射通常选择上臂区域或者肚皮进行相关注射;

3.注射时请核对药品名称,有瑞白和新瑞白,两者有区别,不能混淆,非必要情况不要私自注射。

2022珠海市妇幼保健院试管婴儿成功率:

珠海市妇幼保健院生殖中心试管成功率约40%-52%,近年来,医院生殖中心辅助生殖周期逐年增加,保持了较高的成功率,但试管成功率取决于取卵结果和胚胎质量,以下是珠海市妇幼保健院根据14个基本卵泡的数量预测的试管成功率,请参考下表:

14个卵泡成功率预测

基础卵泡

14颗(月经第2-3天)

推荐方案

单周期/多周期/包成功

促排方案

长方案、短方案、拮抗剂、微刺激

取卵数量

12-18(颗)

成功率

90%-150%(一次取卵结果预估)

授精数量

8-16(枚)

成功率

90%(成熟卵泡受孕概率)

养囊数量

5-10(枚)

成功率

70%(胚胎形成比例)

健康胚胎

3-5(枚)

成功率

50%(经PGS检测完全健康胚胎占比)

注意事项

夫妻双方生理指标完全符合,且取卵效果达到预期则可参考以上数据。

其他

6个卵泡/8个卵泡/12个卵泡/16个卵泡/18个卵泡...

珠海市妇幼保健院试管医生推荐:

1、杨嫦玉

珠海妇幼保健院生殖中心主任医师。从事妇产科临床工作36年,其中专项不孕、辅助生殖技术、生殖内分泌工作20年,可熟练运用不同的超促排卵方案对各种难治性不孕症进行个性化治疗,积累了丰富的反复IVF种植失败和并发症治疗的临床经验。

2、林小民

珠海市妇幼保健院生殖中心副主任医师。1999年毕业于中山医科大学临床医学系,曾到中山大学第三医院、兰州大学第一医院进修,从事生殖男科10多年,是广东医学会生殖医学分会男科组成员、广东泌尿生殖协会男性生殖医学分会常务委员。

珠海市妇幼保健院试管患者成功经验分享:

患者1:通过其他患者介绍到珠海妇幼保健院找到生殖科林小民医生,林医生人非常好,说话温和,永远不会不耐烦,也不冷漠,最近一两年求医看了太多的冷脸和不耐烦,觉得真温暖啊,而且感觉林医生也很善良,感恩能遇上这么好的大夫,希望我这次试管能成功,能实现生育愿望。

患者2:我是一个再婚患者,算是二胎,我的输卵管通而不畅,我都想着没有要孩子的希望了,但是自从珠海妇幼杨嫦玉医生鼓励我后,从排卵到取卵,再到移植一直担心,杨医生细心开导,直到移植成功后我的心才平静下来,非常感谢杨医生。

以上就是关于“珠海市妇幼保健院试管婴儿成功率一览,附试管成功经验分享”的相关内容,如果各位还有疑问的话,可以免费咨询网站工作人员进行解答。

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ELISA样本制备指南及注意事项

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南昌做代孕的选性别流程

定义及介绍

ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附测定)是最基础的免疫学实验之一,其理论基础是抗原抗体的特异性反应。ELISA因其特异性强、灵敏度高、稳定性好而被广泛使用。ELISA试剂盒检测样品包括血清、血浆、细胞培养上清、灌洗液或尿液等生物样本,实验操作步骤并不繁琐,但实验完成后需要把样本检测结果OD值转化为浓度值,从而供下一步分析所用,因此样品的预处理对于后续数据处理和结果分析非常重要。



样本制备指南


1

血清

全血样品于室温放置2小时或2-8℃过夜后于2-8℃,1000×g离心20min,取上清即可检测。收集血液的试管应为一次性的无内毒素试管。避免使用溶血,高血脂样品


2.血浆

抗凝剂推荐使用EDTA-Na

2

,样品采集后30min内于2-8℃,1000×g离心15min,取上清即可检测。

3组织匀浆/组织全蛋白

用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行反复冻融或超声破碎。最后将匀浆液于2-8℃,5000×g离心5-10min,取上清检测。

其余方法:在分析天平(AL204型)上,称量50-100mg组织样本。在样本中加入5倍质量体积的含1%PMSF的1×PBS缓冲液;并用小剪刀等工具将组织样本剪碎(尽可能小块)。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开超声破碎仪,将超声破碎仪的功率调至25%,超声时间2s,间隔时间5s,总时间2min。放入样本,冰上超声3min。视样本匀浆情况调整总时长。超声完成后,将样本放于4℃或冰上裂解30min。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。

组织匀浆液或组织全蛋白中的蛋白浓度对于检测实验的影响至关重要,建议样本蛋白浓度至少1mg/mL以上,较低浓度蛋白的组织匀浆液有可能导致ELISA检测失败。


4.细胞提取液

贴壁细胞

用冷的PBS轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g离心5min后收集细胞;

悬浮细胞

可直接离心收集。收集的细胞用冷的PBS洗涤3次。每10

6

个细胞中加入150-200μLPBS重悬(推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂;若含量很低可减少PBS的体积)并通过反复冻融或超声使细胞破碎。将提取液于2-8℃,1500×g离心10min,取上清检测。注:留取20μL样本,用于后续BCA测定。

其余方法:

对于

贴壁细胞

:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍。以2百万细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。

对于

悬浮细胞

:离心收集细胞,以2×10

6

细胞为例,在样本中加入100μL的含1%PMSF的1×PBS缓冲液,震荡混匀细胞,4℃或冰上裂解30min。用手指轻弹悬浮细胞以充分裂解。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成(5-10)×10

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细胞/管,然后再裂解。必要时可以进行超声处理,超声步骤与组织样本相同。注:1×PBS缓冲液使用前,需加入PMSF,现用现加,PMSF终浓度为1mM。打开离心机,将转速调至12000×g;将样本放入离心机,离心10min,取上清,按需要分装,于-20℃贮存。注:留取20μL样本,用于后续BCA法测定样本蛋白含量。



5.细胞培养上清或其他生物体液

收集液体后于2-8℃,1000×g离心20min,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。注:因细胞培养基中的胎牛血清影响或其他生物体液中杂蛋白的影响,不建议进行BCA法测定样本蛋白含量。

实验细节与注意事项

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1


收集血液应避免产生溶血现象。红细胞破碎,释放大量的过氧化物酶,会影响ELISA检测中的辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AP)的酶促反应,造成检测结果的不确定性。

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2



样品收集后若在1周内进行检测可保存于2-8℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(3个月内检测),避免反复冻融。在检测前,冷冻过的样本应缓慢地融化并离心除去冻融过程产生的沉淀物。室温混匀后使用。

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3


试剂盒检测范围不等同于样本中待测物的浓度范围,建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度并通过预实验确定样本的实际浓度情况。如果样品中待测物浓度过高或过低,请对样本做适当的稀释或浓缩。

04


检测样本的稀释推荐多步稀释法,常规稀释检测为血清/血浆检测稀释度为2倍、20倍、200倍;细胞上清稀释度为5倍、50倍、500倍;建议实验前通过相关文献预估样本中待测物的浓度。

对于稀释倍数比较大的检测样本,参考稀释方案如下:

稀释100倍:一步稀释。取5μL样本到495μL标准品/样本稀释液内,做100倍稀释;

稀释1000倍:两步稀释。取5μL样本到95μL标准品/样本稀释液内,做20倍稀释,再取5μL 20倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释1000倍;

稀释100000倍:三步稀释。取5μL样本到195μL标准品/样本稀释液内,做40倍稀释,再取5μL 40倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,最后取5μL 2000倍稀释样本到245μL标准品/样本稀释液内,做50倍稀释,总共稀释100000倍;

每步稀释时取液量不少于3μL,稀释倍数不超过100倍。每步稀释都需混合均匀,避免起泡。


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若所检样本不在说明书所列样本之中,建议做预实验验证其检测有效性。

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若使用化学裂解液制备组织匀浆或细胞提取液,由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。

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某些重组蛋白可能与试剂盒中捕获或检测抗体不匹配而出现不能检测的情况。

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对于组织匀浆、组织全蛋白、细胞提取液等蛋白提取样本,经BCA法测定样本蛋白含量后,建议进行蛋白浓度的统一化,避免因组织重量、细胞数、产物体积等因素造成的人为误差;例如,统一全部检测样本浓度为1-2mg/mL,进行后续的稀释和检测。


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参考资料
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